发布者：杨燕 发布时间：2019-06-03 浏览数( 0) 【举报】
观察DNA和RNA在细胞中的分布
一、教学目标
1、知识与技能：
（1）学生分析说明DNA和RNA在结构上的不同点
（2）学生回顾显微镜的使用方法
2、过程与方法：
（1）学生掌握制作装片的方法
（2）使用试剂对材料进行染色
3、情感态度和价值观：培养学生的动手能力，提升学生积极、乐观的学习态度。
二、教学重点、难点
1、教学重点：实验原理、显微镜的使用
2、教学难点：甲基绿使DNA呈绿色，吡罗红使RNA呈红色。
三、实验原理与解析
(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。
(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
(3)盐酸的作用
① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；
② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
四、实验器材
1．材料 人的口腔上皮细胞，洋葱表皮细胞，根尖细胞，蛙或蟾蜍的血细胞，果肉细胞。
2．用具 400 mL烧杯，250 mL烧杯，温度计，滴管，消毒牙签，载玻片，盖玻片，铁架台，石棉网，火柴，酒精灯，吸水纸，显微镜。
3．试剂及配制方法
（1）试剂 质量分数为0．9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红G，然后按A液的第二种方法配制（见下文）。
（2）染色剂的配制
①染色剂A液的两种配制方法
第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。
②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16．4 g，用蒸馏水溶解至1 000 mL备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH为4．8的B液（缓冲液）。
五、 主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)
1.取材
① 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；
② 刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③ 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④ 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2.水解
① 解： 将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；
② 保： 将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3.冲洗涂片
① 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；
② 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4.染色
① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
② 吸： 吸去多余染色剂；
③ 盖： 盖上盖玻片。
5.观察
① 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
② 高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。